Методика проведения электрофореза
5. Приготовление геля
Для приготовления 10 мл мономера:
|
|
Концентрирующий гель (КГ) |
Разделяющий гель (РГ) |
|
Реагент |
Концентрация геля 5 % |
Концентрация геля 10 % |
|
Вода дистил. |
5,7 мл |
4,1 мл |
|
30% р-р мономеров |
1,7 мл |
3,3 мл |
|
10% SDS |
0,1 мл |
0,1 мл |
|
0,5 М трис-HCl буфер рН 6,8 |
2,5 мл |
- |
|
1,5М трис-HCl буфер рН 8,8 |
- |
2,5 мл |
|
Внимание! если у вас все готово к заливке геля -добавить темед и персульфат |
||
|
ТЕМЕД |
10 мкл |
10 мкл |
|
Персульфат аммония |
100 мкл |
100 мкл |
|
ДЕГАЗИРОВАТЬ! (добавить воду ) |
|
|
|
Условия проведения электрофореза |
U = 90 В |
U = 180 В (140 В) |
Компоненты
раствора следует перемешать тщательно, но осторожно, не допуская образования
пузырей. Персульфат
аммония и TEMED добавляют последними - именно эти два
компонента инициируют полимеризацию
акриламида.