Книга_Микроскопия

1. История создания микроскопа

1590 г

Первый микроскоп был создан лишь в 1590 году. Изобретение заключалось в том, что  были смонтированы две выпуклые линзы внутри одной трубки,  что послужило основой для создания сложных микроскопов. Фокусировка на исследуемом объекте достигалось за счет выдвижного тубуса. Увеличение микроскопа составляло от 3 до 10 крат. 

    Захарий (Захариас) Янсен                                                            Иоганн (Ханс) Липперсгей
    (нидерл. ок. 1585 — до 1632)             
  голландский мастер по изготовлению очков,                          (нидерл. ок. 1570— сентябрь 1619)

  ему приписывают изобретение телескопа и                            голландский по изготовлению очков, немецкого

  изготовление первого микроскопа.                                           происхождения, наиболее вероятный изобретатель                                                                                                                         телескопа.

Автор: Pierre Borel - Pierre Borel, De vero telescopii inventore,  https://commons.wikimedia.org/w/index.php?curid=3990766,

https://commons.wikimedia.org/w/index.php?curid=3990839

«Occhialino» — двухлинзовый микроскоп, предположительно созданный по чертежу Галилео Галилея мастером Джузеппе Кампани, 1624 г. Позволял исследовать объект в отраженном свете. Фокусировка на объекте достигалась поворотом окуляра или объектива в резьбовом соединении.

1625г - Джованни Фабер предложил для нового изобретения термин  микроскоп от греческих слов:  (греч. μικρός (micron), «маленький»  и σκοπέω (skopein)  «смотрю»)

Микроскоп Роберта Гука (выполнен по чертежам Р. Гука мастером Кристофером Куком), с помощью которого были проведены исследования и сделаны рисунки для книги «Микрография» 

1664 г. - Роберт Гук публикует свой труд «Микрография», собрание биологических гравюр микромира, где вводит термин клетка для структур, которые им были обнаружены в пробковой коре. Книга, вышедшая в сентябре 1664 г (часто датируется 1665 годом), оказала значительное влияние на популяризацию микроскопии, в основном из-за своих впечатляющих иллюстраций.

Микроскоп Левенгука XVII века с увеличением до 300x.

Микроскоп Левенгука был крайне прост и представлял собой пластинку, в центре которой была линза. Наблюдателю нужно было смотреть через линзу на образец, закреплённый с другой стороны, через который проходил яркий свет от окна или свечи. Несмотря на простоту конструкции она позволяла получить увеличение в несколько раз превышающее микроскопы того времени.

Фото: микроскопы 18 века из музея искусств и ремесел, Париж 

© Автор Эдал Антон Лефтери

2. Устройство микроскопа

3. Методы микроскопии

Оптическая

Световая

Изучение препарата осуществляется в проходящем свете, в качестве источника света выступает естественный или искусственный свет (различные лампы).

Темнопольная

Для исследования препарата используется специальный конденсор, который освещает его не снизу, а сбоку «косыми» лучами, которые не попадают в глаза исследователя поле зрения остается темным, а объект на его фоне оказывается светящимся. Используется для изучения живых неокрашенных микроорганизмов.

Фазово-контрастная

Используется  для получения контрастных изображений прозрачных и бесцветных объектов, с помощью фазовоконтрастного конденсора и фазового объектива. Позволяет изучать живые неокрашенные препараты.

Поляризационная

Объект исследуется с помощью двойного лучепреломления (анизотропия). На препарат направляется поляризованный пучок света, в качестве поляризатора используют пленчатые поляроиды или призмы Николя. Позволяет исследовать как окрашенные, так и неокрашенные препараты.

Флюоресцентная (люминесцентная)

Основана на использовании явления люминесценции, т.е. способности некоторых веществ на доли секунд поглощать падающие на них УФ или коротковолновые (сине-фиолетовые) лучи, а затем снова испускать свет. Позволяет обнаружить и установить локализацию и концентрацию живых и погибших микроорганизмов, исследовать прозрачные и непрозрачные объекты, экспресс-идентификация антигенов микроорганизмов в РИФ и тд.

рис.1 Распределение флуоресцирующих белков по спектру

Метод прижизненного (витального) окрашивания основан на использовании очень низких концентраций красителя (растворы от 0,1% до 0,01%). В такой концентрации красители являются малотоксичными для клеток. 

Основные красители

Акридиновый оранжевый

Метиленовый синий — используется для витального окрашивания простейших, изолированных клеток, культур тканей, тонких плёнок живых тканей. Используется раствор 1:1000 — 1:10 000. В ботанике используется для окраски вакуолей, накапливаясь в клетках, содержащих дубильные вещества. Может использоваться для окраски митохондрий[2].

Кислотные (кислые) красители

Индигокармин

Кислый фуксин

Калий-флуоресцин

Эозин

Нейтральные красители

Родамин B