Векторы для клонирования больших фрагментов ДНК. Выделение и
фрагментация ДНК. Подготовка фрагментов ДНК для клонирования.
Векторы для клонирования больших фрагментов ДНК. Выделение и
фрагментация ДНК. Подготовка фрагментов ДНК для клонирования.
Подготовка продуктов амплификации для постановки реакции циклического
секвенирования. Вырезание специфических бэндов из агарозного геля. Очистка
продукта при помощи ExoI/SAP, определение концентрации рабочей матрицы.
Анализ данных, полученных в результате автоматизированного
секвенирования по Сэнгеру. Выравнивание и множественное выравнивание. Работа с
программным обеспечением для хранения и обработки биологических
последовательностей.
Работа с ассеблерами. Сборка бактериального генома на референс и de novo. Аннотация бактериального генома in silico.
Общие нехроматографические методы разделения белков: проточная
цитометрия, субклеточное фракционирование, преципитация, аналитический
двумерный электрофорез (2DPAGE). Принцип фракционирования 2DPAGE.
Матрицы для разделения белков и пептидов. Анализ протеомной карты.
Качественный и количественный виды протеомного анализа в методе 2DPAGE.
Недостатки и ограничения 2DPAGE в протеомных исследованиях.
Основные принципы геномики Роль проекта «Геном человека» в становлении и
развитии геномных и протеомных исследований. Цели, задачи и основные
направления проекта «Геном человека». Особенности организации проекта, его
управления и финансирования. Вклад русской школы молекулярной биологии в
осуществление проекта. Продукт первого этапа реализации проекта «Геном
человека».
Химический метод. Принцип секвенирования нуклеиновых кислот с помощью
метода Максама–Гилберта. Особенности секвенирования ДНК по Сенгеру. Метод
полимеразного копирования.Цепная полимеразная реакция (ПЦР), ее механизм,
последовательность событий и прикладное значение. Анализ больших
последовательностей. Секвенирование клеточных геномов.
Нозерн-блот гибридизация и гибридизация in situ. Анализ локализации белка. Значение иммунохимического анализа in situ и вестерн-блоттинга. Анализ белковых взаимодействий. Изменение активности гена или активности продукта. Методы исследования потери функции гена (случайный мутагенез, подавление генной экспрессии с использованием антисмысловой РНК, рибозимов, РНК-интерференции, подавление активности белка с помощью антител).
Исследование приобретения функции генов по данным суперэкспрессии/ эктопической экспрессии.Перспективы и проблемы функциональной геномики.
Стратегические задачи исследования программы «Функциональная геномика».
Метаболомика: определение, цели, достижения и проблемы. Теоретические
исследования закономерностей метаболизма. Понятие метаболических карт,
метаболических потоков, сетей метаболических потоков. Базы данных по
метаболической систематике. Понятие транскриптомики: объекты, методология и основные
разделы. Фундаментальные и прикладные цели и задачи транскриптомики. Прикладное
значениедостижений транскриптомики для развития биоаналитических технологий в
биомедицине и фармакологии. Молекулярные подходы геномной дактилоскопии и
фармакогеномики.
Технология мультикомплексного анализа белков с использованием
массспектрометрии (МС). Исторические аспекты и этапы развития методов
исследования пептидов и протеинов. Методология ранних исследований,
проводившихся до раскрытия природы белка. Этап, связанный с развитием
фракционирования. Период формирования энзимных методов исследования. Этап
становления протеомного анализа (сепарационные технологии). Предиктивная
протеомика – период, связанный с развитием геномики. Современный дизайн
протеомного исследования. Выбор методов пробоподготовки (получение
биологического образца и его подготовка к исследованию).