Получение биологических жидкостей для исследования. Референтные величины и средний показатель.
Выбор методов исследования
Преаналитический, аналитический и постаналитический этапы.
Биохимические исследования на различных уровнях организации живой
материи.
Унификация биохимических методик. Критерии унификации:
аналитические, технико-экономические, диагнос-тическая ценность. Стандартизация
исследований. Интерпретация лабораторных показателей.
Определение изоэлектрической точки белка. Проведение разделения альбуминов и глобулинов яичного белка методом высаливания.
Осаждение белков при нагревании, солями тяжелых металлов, минеральными кислотами.
Биуретовая реакция. Нингидриновая реакция. Ксантопротеиновая реакция.
Реакция на аргинин и тирозин. Реакция на серосодержащие аминокислоты.
Самостоятельное определение неизвестного вещества в исследуемом растворе.
Определение содержания
общего белка в плазме крови биуретовым методом (метод Кингслея—Вейксельбаума).
Количественное определение
содержания белка в плазме крови по Брэдфорду.
Определение содержания белка
в плазме крови методом Лоури.
Общая характеристика. Механизм действия. Основы кинетики ферментативных
реакций. Ингибирование ферментативной активности.
Влияние температуры на активность α-амилазы слюны. Влияние реакции среды
на активность ферментов. Определение оптимума рН для α-амилазы слюны.
Влияние активаторов и ингибиторов на активность α-амилазы слюны. Изучение
специфичности действия ферментов.
Классификация по принципу фракционирования, по способу элюции, по
расположению неподвижной фазы.
Хроматографический процесс. Хроматографическиая зона. Концепция
теоретических тарелок.
Кинетическая теория хроматографии. Разрешение близко мигрирующих зон.
Оптимизация условий.
Газо-адсорбционная хроматография. Газо-жидкостная хроматография. Капиллярная газовая хроматография.
Реакционная газовая хроматография. Хромато-масс-спектрометрия
Молекулярная адсорбционная хроматография. Обращенно-фазовая ВЭЖХ (ОФ ВЭЖХ). Использование ОФ ВЭЖХ для решения экологических задач
Подготовка растворителя и пробы. Типичные неисправности, способы обнаружения и устранения. Методические аспекты обеспечения высокой эффективности колонки. Проблемы изменения селективности колонок. Проблемы воспроизводимости между параллельными вводами пробы. Регенерация загрязненных колонок
Детекторы. Коллектроры фракций. Вспомогательное оборудование.
Классификация. Принцип метода. Особенности материалов-носителей.
Зональный электрофорез. ЭФ на бумаге. ЭФ в тонком слое.
Гель-электрофорез. ПААГ, ДСН-ПААГ, агароза. Принцип метода. Стадии
постановки реакции. Применение.
Высоковольтный и проточный ЭФ. Принцип метода. Стадии постановки реакции.
Применение.
2D электрофорез с
изоэлектрофокусированием. Принцип метода. Стадии постановки реакции.
Применение.
Диск-электрофорез. Принцип метода.
Стадии постановки реакции. Применение.
Простой иммуноэлектрофорез. Принцип метода. Стадии постановки реакции.
Применение.
Встречный иммуноэлектрофорез. Принцип метода. Стадии постановки реакции.
Применение.
Ракетный иммуноэлектрофорез. Принцип метода. Стадии
постановки реакции. Применение.
Двухмерный или перекрестный иммуноэлектрофорез Лорелла. Принцип метода. Стадии
постановки реакции. Применение.
Иммунологические исследования на различных уровнях организации живой материи. Количественное определение популяций лимфоцитов. Проточная цитометрия. Маркеры активации лимфоцитов. CD-классификация мембранных молекул иммунокомпетентных клеток.
Определение цитотоксической активности Т-лимфоцитов. Определение
пролиферативной способности лимфоцитов.
Оценка ГЗТ in vivo. Оценка цитотоксической активности естественных
киллеров. Методы количественного определения иммуноглобулинов.
Определение адгезивных свойств. Методы определения хемотаксиса
лейкоцитов.
Определение фагоцитарной способности. Оценка бактерицидной активности.
Исследование компонентов классического и альтернативного путей активации
комплемента.
Классификация. Основные принцципы. Иммунофлюоресцентный анализ.
Радиоиммунный анализ. Иммуноферментный анализ.
Модификации ИФА(ELISA, EIA, EMIT). Структура и свойства антигенов и антител.
Физико-химические взаимодействия антиген-антитело. Ферменты, как метки в
иммуноанализе.
ИФА для обнаружения антител. ИФА
для обнаружения антигенов. Иммуносорбенты. Твердофазные носители. Иммобилизация
антигенов или антител. Конъюгаты, используемые в ИФА. Субстраты и хромогены.
Методы ИФА. Твердофазный ИФА ("Сэндвич" метод, непрямой,
конкурентный, ингибирующий, прямой методы); гомогенный ИФА.
Применение и диагностическая ценность ИФА. Динамика изменений
показателей ИФА-тестов при инфицировании/при лечении. Интерпретация
результатов.
1 стадия - оценка сходимости. 2 стадия - оценка воспроизводимости и
построение контрольных карт.
3 стадия – оперативный внутрилабораторный контроль.
Внешняя оценка качества. Чувствительность. Специфичность.
Основные принципы метода. Вид. Этапы исследования. Применение в
диагностике.
Принцип метода. Типы реакций (прямая, непрямая, конкурентная). Значение.
Диагностическая ценность.
Материалы и оборудование. Стадии исследования в зависимости от типа
реакции. Окрашивание дополнительным цветом. Контроль качества анализа. Среды
для заключения и хранения препаратов.
Световая микроскопия. Фазово-контрастная микроскопия. Принцип метода.
Особенности строения микроскопа. Особенности пробоподготовки. Чувствительность
и специфичность.
Поляризационная микроскопия. Интерференционная микроскопия. Принцип
метода. Особенности строения микроскопа. Особенности пробоподготовки.
Чувствительность и специфичность.
Микроскопия в темном поле. Ультрафиолетовая микроскопия. Флуоресцентная
микроскопия. Принцип метода. Особенности строения микроскопа. Особенности
пробоподготовки. Чувствительность и специфичность.
Молекулярно-генетическсие исследования на различных уровнях организации
живой материи.
Флуоресцентная in situ гибридизация (FISH); хромогенная in situ
гибридизация (CISH). Принципы методов. Диагностическая и научная значимость.
Классический цитогенетический анализ (кариотипирование). Принцип метода. Диагностическая и научная
значимость.
Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР); Саузерн-блоттинг. Принципы методов.
Диагностическая и научная значимость.
Анализ первичной последовательности ДНК (секвенирование); микрочипирование. Принципы
методов. Диагностическая и научная значимость.
Методы. Основные принципы. Применение.
Основные виды и принципы детекции. Применение.
Принцип метода полимеразной цепной реакции. Наличие в реакционной смеси
ряда компонентов. Циклический температурный режим.
Принцип метода полимеразной цепной реакции. Стадии. Основные принципы
подбора праймеров. Эффект "плато".
Принцип метода. Стадии.
Элетрофоретическая детекция продуктов амплификации ПЦР.
Основные требования к помещениям.
Мультиплексный анализ. Преимущества и недостатки.
ДНК-зонды. Мечение двуцепочечной ДНК. Метка, работающая в фазу элонгации. Метки,
работающие в фазу отжига.
Анализ кривых плавления.
Принцип метода. Преимущества и недостатки.
Рабочий протокол: создание капельных эмульсий, амплификация,
идентификация сигнала в каплях, анализ результатов.