5.3 Аналитические проблемы определения холестерина липопротеинов низкой плотности

Становление теории атеросклероза – история весьма интригующая и поучительная, в которой ярко отражены основные проблемы современной клинической химии. В развитии теории можно выделить три ключевых этапа. Первый – это удачный выбор Н.Н.Аничковым экспериментальных животных – кроликов. Результаты этих экспериментов указывали на возможную взаимосвязь между холестерином и риском развития патологии. Наряду с этим, именно особенности экспериментов Аничкова, а именно особенности метаболизма холестерина у кроликов и крайне высокие дозы холестерина, привели к тому, что эта теория стала реально развиваться лишь в 1940-1950 годах, по мере накопления клинических данных.

Второй этап становления теории – это открытие липопротеинов сыворотки крови, гетерогенных надмолекулярных частиц, которые, как оказалось в дальнейшем, имеют особое значение в транспорте холестерина. В зависимости от привлекаемого метода, эта гетерогенная смесь частиц может быть разделена на некоторое число более или менее гомогенных фракций. Электрофорез на агарозе и ацетате целлюлозы, или осаждение солями позволяет разделить эти частицы на 2-3 фракции примерно сходные по составу. Эти фракции получили название a- и b-липопротеинов. Более детальная картина может быть получена путем ультрацентрифугирования сыворотки крови в градиенте плотности. При определенных условиях, распределение этих частиц по электрофоретической подвижности в полиакриламидном геле (ПААГ-электрофорез) приводит к результатам, близким к ультрацентрифугированию. Однако как ультрацентрифугирование, так и ПААГ-электрофорез процедуры, скорее, исследовательские и возможность их внедрения в клиническую практику весьма проблематична даже в настоящее время.

Третий этап был также весьма драматичен и связан с личностью Джона Гофмана. Именно благодаря его личным усилиям и настойчивости были установлены те условия ультрацентрифугирования, при которых уровень холестерина в одной из фракций липопротеинов имел наиболее высокую степень связи с клинической картиной (риском развития атеросклероза). Данная фракция, исходя из седиментационных свойств, получила название «липопротеинов низкой плотности». Холестерин липопротеинов низкой плотности (ХС-ЛПНП) в настоящее время считается важнейшим контролируемым фактором, а также показателем эффективности гиполипидемической терапии.

Из-за особенностей строения этих частиц, оказалось, что именно они представлены, главным образом, в b-фракциях, полученных альтернативными способами – осаждением солями или при электрофорезе в агарозном геле. Простота и доступность данных способов фракционирования послужила основой для создания клинических методов анализа, которые в настоящее время относят к «методам первого поколения» (табл.1).