Книга_Микроскопия

3. Методы микроскопии

Оптическая

Световая

Изучение препарата осуществляется в проходящем свете, в качестве источника света выступает естественный или искусственный свет (различные лампы).

Темнопольная

Для исследования препарата используется специальный конденсор, который освещает его не снизу, а сбоку «косыми» лучами, которые не попадают в глаза исследователя поле зрения остается темным, а объект на его фоне оказывается светящимся. Используется для изучения живых неокрашенных микроорганизмов.

Фазово-контрастная

Используется  для получения контрастных изображений прозрачных и бесцветных объектов, с помощью фазовоконтрастного конденсора и фазового объектива. Позволяет изучать живые неокрашенные препараты.

Поляризационная

Объект исследуется с помощью двойного лучепреломления (анизотропия). На препарат направляется поляризованный пучок света, в качестве поляризатора используют пленчатые поляроиды или призмы Николя. Позволяет исследовать как окрашенные, так и неокрашенные препараты.

Флюоресцентная (люминесцентная)

Основана на использовании явления люминесценции, т.е. способности некоторых веществ на доли секунд поглощать падающие на них УФ или коротковолновые (сине-фиолетовые) лучи, а затем снова испускать свет. Позволяет обнаружить и установить локализацию и концентрацию живых и погибших микроорганизмов, исследовать прозрачные и непрозрачные объекты, экспресс-идентификация антигенов микроорганизмов в РИФ и тд.


рис.1 Распределение флуоресцирующих белков по спектру


Метод прижизненного (витального) окрашивания основан на использовании очень низких концентраций красителя (растворы от 0,1% до 0,01%). В такой концентрации красители являются малотоксичными для клеток. 

Основные красители

Акридиновый оранжевый

Метиленовый синий — используется для витального окрашивания простейших, изолированных клеток, культур тканей, тонких плёнок живых тканей. Используется раствор 1:1000 — 1:10 000. В ботанике используется для окраски вакуолей, накапливаясь в клетках, содержащих дубильные вещества. Может использоваться для окраски митохондрий[2].

Кислотные (кислые) красители

Индигокармин

Кислый фуксин

Калий-флуоресцин

Эозин

Нейтральные красители

Родамин B




Распределение флуоресцирующих белков по спектру