Биологические матрицы представляют собой сложные смеси эндогенных
компонентов, таких как белки, соли, липиды, которые могут взаимодействовать с
аналитами в процессе разделения и хроматографического определения. Белки, в
значительных количествах присутствующие в плазме крови, могут необратимо адсорбироваться на хроматографической колонке, что приведет к ухудшению
эффективности и резкому сокращению срока службы колонки.
Наиболее простой и быстрой процедурой удаления белков биологической
матрицы является их осаждение различными реагентами. Наиболее
распространенными осадителями являются такие органические растворители как
ацетонитрил, метанол, их смесь, добавки в органические
растворители кислот и щелочей. Осаждение белков проводят и сильными
кислотами: муравьиной и хлорной. Применение такого приема позволяет
удалить до 98% белков плазмы крови. Процедура осаждения белков является
быстрой, недорогой и простой в исполнении и может быть применена для
широкого спектра аналитов.
Осаждение белков может также использоваться для образцов плазмы или
сыворотки крови как стадия очистки, предваряющая жидкостно-жидкостную
экстракцию или сорбционное концентрирование. После осаждения
белков проводится центрифугирование и отделение надосадочного слоя, который
и подвергается анализу. Экспрессность является одним из основных преимуществ
данного подхода.
Однако, если требуются низкие пределы обнаружения аналитов,
приходится проводить стадию концентрирования. Для этого растворитель из
надосадочной жидкости выпаривают досуха и содержимое перерастворяют в
меньшем объеме перед вводом в колонку.
Основным недостатком осаждения белков считают недостаточную степень
извлечения. Так, ряд авторов отмечают, что степень извлечения аналита при осаждении
белков обычно не превышает 60%, что вызвано соосаждением аналита с белками
плазмы крови и сложностью биологической матрицы. Кроме того, эффекты
влияния остаточных компонентов после осаждения белков (матричные эффекты)
выявлены в ряде масс-спектрометрических исследований с
электрораспылительной ионизацией. В основном, это подавление
сигнала аналита, приводящее к недостаточной чувствительности и
несоответствию значений повторяемости и правильности экспериментов установленным валидационным требованиям. Именно эти недостатки
ограничивают использование процедуры осаждения белков при разработке
методик определения лекарственных средств в биологических жидкостях.