Дисциплина Экспериментальная патобиохимия клетки

Правила приготовления препаратов едины вне зависимости от того, делается мазок специалистом, получившим материал, или готовится в лаборатории.

Стекла для препаратов нужно использовать новые, стандартного размера, чистые, обезжиренные и сухие.

Хороший мазок должен быть максимально тонким (максимально приближающимся к однослойному), равномерной толщины (не волнообразным) на всем протяжении. Материал распределяется по стеклу краем шлифованного стекла или ребром иглы.

Мазок должен начинаться на 1 см от узкого края предметного стекла и заканчиваться примерно в 1,5 см от другого края; мазок не должен достигать широкого края стекла, между мазком и широким краем предметного стекла должно оставаться расстояние не менее 0,3 см.

Жидкости, полученные при пункции, тут же центрифугируют, сливают верхний слой центрифугата, а из осадка делают мазки с помощью специального шлифованного стекла или пластинки (методика приготовления препаратов аналогична мазкам крови). При этом получаются тонкие препараты со щеточкой по краю для цитологического исследования.

Жидкостная цитология

• Лучшим способом обработки материала для цитологического исследования является жидкостная цитология. Препараты, приготовленные на цитоцентрифуге, однослойные, материал распределен равномерно на определенной поверхности.
• Препараты удобно просматривать, так как материал распределен равномерно.
• При необходимости проведения иммуноци-тохимических исследований экономятся дорогостоящие реактивы, результаты удобно интерпретировать

Фиксация и окрашивание препаратов

Мазки можно окрашивать любым из красителей, используемых в цитологической диагностике, однако наилучшие результаты получаются при использовании различных модификаций метода Романовского (по Паппенгейму, Лейшману и др.). После приготовления мазков предварительной их фиксации не требуется, они высушиваются на воздухе.

Схема окрашивания мазков по методу Паппенгейма (модификация)

1. Высушить мазок на воздухе.
2. Опустить в фиксатор-краситель Мая-Грюнвальда на 3 минуты.
3. Промыть водопроводной водой.
4. Стряхнуть избыток воды.
5. Докрашивание азур-эозином: 2 части 0,1% раствора азура, 1 часть 0,1% раствора водно-растворимого эозина и 3 части дистиллированной воды pH 6,8-7,2, окрашивание 20 минут. Смесь красителей готовят перед работой (ех tempore). Мазки окрашиваются от 20 до 30 минут. (Время необходимо устанавливать опытным путем в зависимости от свойств красителей, температуры воздуха, характера материала и других факторов.)
6. Промыть водопроводной водой.
7. Высушить на воздухе.

Методика окрашивания по Лейшману

1. Высушить мазок на воздухе.
2. Опустить в фиксатор-краситель Лейшмана на 3 минуты.
3. Промыть водопроводной водой.
4. Стряхнуть избыток воды.
5. Опустить в краску (или залить краской) 40 мл 0,1% красителя азур II, 30 мл 0,1% воднорастворимого эозина, 70 мл дистиллированной воды. Смесь красителей готовят перед работой (ех tempore). Мазки окрашиваются от 20 до 40 минут.