Практическая работа к занятию №2.

Опыт № 1: Фракционное осаждение белков сыворотки крови сернокислым аммонием (высаливание).

Высаливание — это обратимое осаждение белков с помощью больших концентраций нейтральных солей: NaCl, (NH4)2SO4. Метод используется для выделения и очистки ферментов, лечебных γ-глобулиновых препаратов.

Техника выполнения. К 1 мл белка добавить 1 мл насыщенного раствора (NH4)2SO4. При создавшемся 50 % насыщении раствора выпадут в осадок глобулины. Через 10 мин осадок отфильтровать. Белок с фильтра смыть в отдельную чистую пробирку избытком дистиллированной воды (4–5 мл). К фильтрату добавить сухой порошок (NH4)2SO4 до полного насыщения. Спустя 10 мин выпавшие в осадок альбумины отфильтровать, в безбелковый фильтрат добавить 5 мл дистиллированной воды и сохранить. Осадок альбуминов с фильтра смыть в отдельную чистую пробирку избытком дистиллированной воды. С содержимым всех трех пробирок провести биуретовую реакцию (биуретовый реактив студенты готовят самостоятельно, смешивая 10 % NaOH и 1 % CuSO4 в соотношении 10:1). В пробирках с растворами альбумина и глобулина реакция положительная, а с безбелковьм фильтратом — отрицательная.

Опыт № 2:Осаждение белков органическими кислотами.

Техника выполнения. В 2 пробирки наливают по 10 капель раствора белка. В одну пробирку добавляют 4–5 капель трихлоруксусной кислоты, а в другую — 4–5 капель сульфосалициловой кислоты. Эти реакции используют в лабораторной практике для обнаружения и удаления белков из растворов.

Опыт № 3: Осаждение белков спиртом или ацетоном.

Техника выполнения. К 10 каплям раствора белка добавить несколько капель ацетона или спирта. Выпадает осадок белка. При добавлении избытка дистиллированной воды осадок растворяется.


Последнее изменение: Вторник, 20 Сентябрь 2016, 10:50