Дисциплина Общая биохимия (часть 1_5 семестр)

Практическая работа

Опыт № 1: Гидролиз лецитина и обнаружение продуктов гидролиза.

Техника выполнения. Навеску лецитина (0,5 г) помещают в пробирку, наливают 10мл 30% раствора NаОН, закрывают пробкой с обратным холодильником и выдерживают 30мин на кипящей водяной бане. Содержимое пробирки охлаждают под проточной водой и анализируют продукты гидролиза:

а) холин обнаруживают по образованию в процессе гидролиза триметиламина, который придает гидролизату запах селедочного рассола.

б) фосфорную кислоту обнаруживают реакцией с молибдатом аммония. К 0,5 мл гидролизата добавляют 1 мл раствора молибдата аммония. Реакционную смесь кипятат. Отмечают появление интенсивного желтого окрашивания раствора, обусловленного образованием фосфомолибдата аммония.

в) непредельные высшие жирные кислоты обнаруживают реакцией с йодом. К 0,5мл гидролизата по каплям добавляют раствор йода. Отмечают обесцвечивание раствора.

г) глицерин обнаруживают по образованию глицерата меди. К 0,5 мл щелочного гидролизата добавляют 0,5 мл 1 % раствора сульфата меди (опытная пробирка). В контрольной пробе смешивают равные объемы 10 % раствора NаОН и раствора сульфата меди. Сравнить окраску растворов в опытной и контрольной пробирках.

В выводе записать схему щелочного гидролиза лецитина.

Опыт № 2: Качественная реакция на холестерин Либермана–Бурхарда.

Принцип метода. Цветные реакции на холестерин основаны на его дегидратации под действием концентрированной серной кислоты с последующим превращением в непредельные углеводороды с сопряженными двойными связями. Эти соединения дают окрашенные продукты с серной кислотой и уксусным ангидридом.

Ход определения. Реакцию Либермана–Бурхарда следует проводить параллельно с хлороформным экстрактом головного мозга и с раствором холестерина в хлороформе.

К 1 мл хлороформного экстракта головного мозга (пробирка № 1) или к 1 мл раствора холестерина в хлороформе (пробирка № 2) добавить по 10 капель уксусного ангидрида и по 2капли концентрированной серной кислоты. Растворы перемешать. Жидкость приобретает красную окраску, затем цвет быстро меняется последовательно на красно-фиолетовый, фиолетовый, аметистово-синий, синий и зеленый.