Дисциплина Общая биохимия (часть 1_5 семестр)

Практическая работа

Опыт № 1:Определение общих липидов в сыворотке крови по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом.

Группу общих липидов плазмы (сыворотки крови) составляют нейтральные жиры (триацилглицеролы), фосфолипиды (ФЛ), свободный или неэстерифицированный холестерин (НЭХС), эфиросвязанный холестерин (ЭХС), гликолипиды, неэстерифицированные (свободные) ЖК (НЭЖК). Подавляющее большинство перечисленных соединений (прежде всего ФЛ, ХС, ТАГ) образуют ассоциаты (липидно-белковые комплексы, ЛП) с белками – апопротеинами. Большая часть НЭЖК образует комплексы с альбумином крови. Содержание общих липидов в сыворотке крови здоровых людей составляет 4–8 г/л.

Гиперлипидемия (гиперлипемия) – увеличение концентрации общих липидов плазмы как физиологическое явление может наблюдаться через 1–4 ч после приема пищи. Концентрация липидов в крови изменяется при ряде патологических состояний. Гиперлипемия отмечается у больных сахарным диабетом, при нефротическом синдроме, остром и хроническом гепатитах, атеросклерозе, наследственных гиперлипопротеинемиях, а также других заболеваниях.

Принцип метода. Продукты гидролиза липидов, образующиеся под действием серной кислоты, взаимодействуют с фосфованилиновым реактивом с образованием красного окрашивания. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию общих липидов в сыворотке крови.

Техника выполнения. Реактивы: (1) стандартный раствор (общие липиды 8 г/л) – реактив 1; (2) раствор ванилина (ванилин и кислота ортофосфорная) – реактив 2; (3) кислота серная концентрированная. Готовят опытную, стандартную и контрольную пробы, как указано в таблице.

Перемешивают и оставляют стоять 50 мин при температуре от 15–25 С. Не позднее чем через 60 мин измеряют оптическую плотность пробы (А₁) и стандарта (А₂) против контрольного раствора в кювете толщиной 0,5 см при длине волны 510–550 нм.

Расчёт: С_оп (г/л) = С_ст ´ А₁ /А₂