Векторы для клонирования больших фрагментов ДНК. Выделение и фрагментация ДНК. Подготовка фрагментов ДНК для клонирования.
Подготовка продуктов амплификации для постановки реакции циклического секвенирования. Вырезание специфических бэндов из агарозного геля. Очистка продукта при помощи ExoI/SAP, определение концентрации рабочей матрицы.
Анализ данных, полученных в результате автоматизированного секвенирования по Сэнгеру. Выравнивание и множественное выравнивание. Работа с программным обеспечением для хранения и обработки биологических последовательностей.
Общие нехроматографические методы разделения белков: проточная цитометрия, субклеточное фракционирование, преципитация, аналитический двумерный электрофорез (2DPAGE). Принцип фракционирования 2DPAGE.
Матрицы для разделения белков и пептидов. Анализ протеомной карты. Качественный и количественный виды протеомного анализа в методе 2DPAGE. Недостатки и ограничения 2DPAGE в протеомных исследованиях.
Основные принципы геномики Роль проекта «Геном человека» в становлении и развитии геномных и протеомных исследований. Цели, задачи и основные направления проекта «Геном человека». Особенности организации проекта, его управления и финансирования. Вклад русской школы молекулярной биологии в осуществление проекта. Продукт первого этапа реализации проекта «Геном человека».
Химический метод. Принцип секвенирования нуклеиновых кислот с помощью метода Максама–Гилберта. Особенности секвенирования ДНК по Сенгеру. Метод полимеразного копирования.Цепная полимеразная реакция (ПЦР), ее механизм, последовательность событий и прикладное значение. Анализ больших последовательностей. Секвенирование клеточных геномов.
Нозерн-блот гибридизация и гибридизация in situ. Анализ локализации белка. Значение иммунохимического анализа in situ и вестерн-блоттинга. Анализ белковых взаимодействий. Изменение активности гена или активности продукта. Методы исследования потери функции гена (случайный мутагенез, подавление генной экспрессии с использованием антисмысловой РНК, рибозимов, РНК-интерференции, подавление активности белка с помощью антител).
Исследование приобретения функции генов по данным суперэкспрессии/ эктопической экспрессии.Перспективы и проблемы функциональной геномики. Стратегические задачи исследования программы «Функциональная геномика». Метаболомика: определение, цели, достижения и проблемы. Теоретические исследования закономерностей метаболизма. Понятие метаболических карт, метаболических потоков, сетей метаболических потоков. Базы данных по метаболической систематике. Понятие транскриптомики: объекты, методология и основные разделы. Фундаментальные и прикладные цели и задачи транскриптомики. Прикладное значениедостижений транскриптомики для развития биоаналитических технологий в биомедицине и фармакологии. Молекулярные подходы геномной дактилоскопии и фармакогеномики.
Технология мультикомплексного анализа белков с использованием массспектрометрии (МС). Исторические аспекты и этапы развития методов исследования пептидов и протеинов. Методология ранних исследований, проводившихся до раскрытия природы белка. Этап, связанный с развитием фракционирования. Период формирования энзимных методов исследования. Этап становления протеомного анализа (сепарационные технологии). Предиктивная протеомика – период, связанный с развитием геномики. Современный дизайн протеомного исследования. Выбор методов пробоподготовки (получение биологического образца и его подготовка к исследованию).